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使用馬爾文子公司Viscotek的SEC/GPC表征多肽的水動力變化
2009-8-3 來源:英國馬爾文儀器有限公司
關(guān)鍵詞:色譜 尺寸排阻色譜

根據(jù)巴黎巴斯德研究所科學(xué)家們的研究,當(dāng)尺寸排阻色譜與三重檢測器(SEC-TDA)聯(lián)用后,能夠分辨蛋白質(zhì)的寡聚、水合與粒形變化。這一工作是通過使用馬爾文的子公司--viscotek公司的高級凝膠色譜系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的。

通過整合Viscotek的三重檢測陣列系統(tǒng)(TDA302)與GPCmax色譜系統(tǒng),研究團(tuán)隊(duì)表征了百日咳致病菌的主要毒性物質(zhì)——腺苷酸環(huán)化酶毒素碎片的結(jié)構(gòu)與水動力學(xué)特征。研究團(tuán)隊(duì)顯示鈣結(jié)合導(dǎo)致了蛋白質(zhì)中重要的水動力學(xué)變化,為更深入地了解其生物功能打下基礎(chǔ)。研究成果已發(fā)表在著名雜志Biological Chemistry上(2009年1月刊,1781-1789頁)。

尺寸排阻色譜(SEC)的傳統(tǒng)校準(zhǔn)方式是基于擁有已知標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的水動力學(xué)體積。此類校準(zhǔn)過程會由于目標(biāo)蛋白質(zhì)與SEC介質(zhì)之間可能存在的相互作用產(chǎn)生誤差。因此,傳統(tǒng)校準(zhǔn)無法提供分子質(zhì)量或可靠的水動力學(xué)信息。

Viscotek TDA302使用一系列檢測器對流出樣進(jìn)行。檢測器包括一個紫外-可見分光光度計(jì),一個差分粘度儀(RI),一個小角(7°)光散射檢測器,一個側(cè)向光散射(90°)檢測器,以及一個壓差韋斯特橋粘度計(jì)。OmniSEC操作軟件能夠分析所有收集到的數(shù)據(jù),并能以恰當(dāng)?shù)姆绞斤@示。通常,紫外檢測器與差分粘度計(jì)可用于測定蛋白質(zhì)濃度,以獲取絕對分子質(zhì)量(MM)與特性粘度(IV)信息。選用用了Viscotek TD302系統(tǒng),絕對分子量(MM)便可直接從光散射數(shù)據(jù)獲得,而特性粘度亦可直接從粘度計(jì)獲取,從而提供蛋白質(zhì)的含水量與形狀信息。在本應(yīng)用中,特性粘度是唯一受鈣結(jié)合影響的水動力學(xué)參數(shù)。這一系統(tǒng)提供的信息是了解蛋白質(zhì)結(jié)合與折疊行為的基本信息,也是了解蛋白質(zhì)是如何影響人體的關(guān)鍵。

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(子妍)
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