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廣西師范大學沈星燦教授、蔣邦平教授團隊Biomaterials:傷口微環境水凝膠-苯胺衍生物的原位聚合用于裸眼實時監測感染和抑制細菌
2022-09-16  來源:高分子科技

  在自然界中,許多生物組織、器官和細胞外基質都是由適應性水凝膠組成的。在這些水凝膠基生物中,一系列的生物聚合物,如多糖、黑色素,被控制合成,并在生物活性中發揮重要作用。受此啟發,人工操控聚合物在水凝膠中原位生物合成將是獲得可以滿足生物需求材料的一個非常重要的途徑。然而,由于生物環境及水凝膠體系的高度復雜性,這項任務仍極具挑戰性。


  為了解決這些問題,廣西師范大學沈星燦教授、蔣邦平教授團隊近日基于海藻酸鈣(CA)水凝膠平臺,利用傷口微環境過表達的雙氧水(H2O2)成功激活了苯胺二聚體衍生物在水凝膠中的原位共軛聚合,用于傷口感染檢測與細菌抑制。具體為:將易聚合的N-3-磺丙基)對氨基二苯胺(SPA)與辣根過氧化物酶(HRP)同時載入CA凝膠中,獲得CA負載SPAHRP水凝膠(CA@SPA-HRP);通過預加載的HRP催化傷口微環境過量的H2O2產生羥基自由基(?OH),引發SPA水凝膠內原位聚合生成polySPAPSPA )。得益于PSPA優異的近紅外(NIR)吸收特性,這種聚合可以巧妙地用于肉眼和光聲信號實時監測H2O2以及NIR光介導的細菌光熱抑制(圖1;進一步結合?OH的化學動力學活性,能夠更持續有效地殺滅和抑制感染傷口處的細菌。綜上,該CA@SPA-HRP水凝膠是第一例用于傷口感染的智能水凝膠體系,能巧妙地利用生物微環境激活水凝膠中功能性共軛聚合物的原位生物合成,以實現裸眼實時監測傷口感染和抑制細菌。


1. 傷口微環境過量的H2O2激活SPACA水凝膠中的原位聚合及其診療應用示意圖。 


2.ASPACV曲線。(BCA@SPA-HRP水凝膠用H2O2處理后的DMPO信號。(C)水凝膠的紫外-可見吸收光譜。(DCA@SPA-HRP水凝膠用H2O2處理后的EPR信號。(E)電荷轉移電阻變化。(FPSPA在水中和凝膠中的分子量分布。(GSPA在水凝膠中聚合示意圖。


  SPA低的氧化還原電位(圖2A),以及HRP能夠催化H2O2產生?OH(圖2B),為CA@SPA-HRP水凝膠中SPA的原位聚合提供了化學基礎。此外,EPR、EISGPC(圖2D、EF)進一步證實了SPA在水凝膠中的原位聚合生成PSPA。結合?OH生成的結果,表明HRP催化H2O2生成的?OH可以有效地激活SPA單體的原位聚合,獲得PSPA。 


3. ASPA濃度依賴的光聲強度。(BH2O2濃度依賴的光聲強度。(CCA@SPA-HRP水凝膠在感染和未感染傷口表面的顏色變化。(D)實時的光聲圖像以及(E)對應的光聲強度。


  PSPA優異的NIR吸收能力,賦予了SPA在水凝膠中原位聚可用于H2O2響應的NIR介導的診療應用。即使在H2O2濃度為50 mM時(圖3B),仍能檢測到光聲(PA)信號。表明該聚合方法對H2O2具有較高的檢測靈敏度,是檢測H2O2的一個很好的模型反應。動物實驗進一步證實裸眼觀察和PA可被用于實時監測傷口感染,感染組織有明顯的肉眼可見顏色變化以及PA信號變化。隨著粘附時間的增加,PA信號逐漸增強,這與感染創面CA@SPA-HRP水凝膠顏色變化的結果一致(圖3CD)。 


4. 不同處理后A大腸桿菌(E. coli)和B耐甲氧西林葡萄球菌(MRSA)在不同時間點的光密度。(C不同處理后細菌的掃描電鏡。


  通過監測不同治療組處理后的光密度(OD600),進一步研究了CA@PSPA-HRP水凝膠在不同孵育時間點的抗菌效果(圖4AB)。孵育2 h后,未被殺死的細菌在化學動力學治療(CDT)組和光熱治療(PTT)組中開始增殖,而PTT/CDT組的細菌即使在孵育24 h后仍受到顯著抑制。此外,細菌SEM(圖4C)也進一步證明PTT聯合后續的CDT單一治療更能實現有效的抗菌效果。 


圖5. (A)第7天傷口的免疫熒光染色圖片以及(B)對應的血管密度。(C)第7天傷口的免疫組織化染色圖片以及(D)對應的血管密度。


  新生血管直接影響傷口中O2和營養物質的運輸。CD31是新生血管的標志物,a-SMA是血管平滑肌細胞的標志物,通常用于評估新生血管重塑和傷口愈合。在第7天對創面組織切片進行a-SMACD31的雙染色,PTT/CDT組的血管密度和成熟指數顯著升高,說明具有PTT/CDT協同的CA@PSPA-HRP水凝膠可促進血運重建,從而加速傷口愈合。

  該工作以H2O2-activated in situ polymerization of aniline derivative in hydrogel for real-time monitoring and inhibition of wound bacterial infection ”為題發表在《Biomaterials》上。廣西師范大學化學與藥學學院博士研究生王璦輝,碩士研究生樊桂師為該論文第一作者,沈星燦教授和蔣邦平教授為該論文通訊作者。該工作獲得了國家自然科學基金項目(2197702222265004,21671046)和廣西自然科學基金項目(2018GXNSFFA281004,2017GXNSFGA198004,AD17129007)的資助。


  原文鏈接:https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0142961222004380

  下載:H2O2-activated in situ polymerization of aniline derivative in hydrogel for real-time monitoring and inhibition of wound bacterial infection

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(責任編輯:xu)
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