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西京醫(yī)院石小鵬、長(zhǎng)安大學(xué)顏錄科 JCR:具有持續(xù)釋放臭氧增強(qiáng)抗菌性能并改善傷口愈合的新型臭氧化油乳液水凝膠
2024-11-26  來(lái)源:高分子科技

  抗菌水凝膠廣泛應(yīng)用在藥物載體、組織支架和傷口敷料等生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,是生物醫(yī)用材料的研究熱點(diǎn)。臭氧(O3)具有廣譜抗菌活性、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗缺氧、無(wú)殘留等優(yōu)勢(shì),被用于緩解術(shù)后疼痛、控制斑塊和生物膜、加速傷口愈合以及使植入物表面功能化。然而臭氧半衰期短、難以儲(chǔ)存,限制了它在抗菌水凝膠中的直接應(yīng)用。


  西京醫(yī)院石小鵬/長(zhǎng)安大學(xué)顏錄科團(tuán)隊(duì)提出一種制備具有持續(xù)釋放O3的新型臭氧化油乳液水凝膠(ozonegel的簡(jiǎn)單方法,采用吐溫-80和蒙脫石(MMT)作為乳化劑,將油水混合物均質(zhì)化為乳液,3-[二甲基-[2-2-甲基丙-2-烯酰氧基)乙基]氮基]丙烷-1-磺酸鹽(DMAPS)在乳液中光引發(fā)聚合,得到兩性離子PDMAPS乳液水凝膠在臭氧化油中,大量O3與植物油中的不飽和雙鍵相結(jié)合,當(dāng)臭氧油接觸溫暖的滲出物時(shí),會(huì)緩慢分解并產(chǎn)生活性氧(ROS[臭氧、氧氣和過(guò)氧化氫(H2O2],賦予凝膠生物活性和傷口治療效果。


1. 臭氧油乳液水凝膠制備過(guò)程的示意圖


  通過(guò)附著在不同材料表面測(cè)試PDMAPS-MMT水凝膠的粘合性能。該水凝膠可牢固地粘附在人體皮膚上(圖2a),粘附在兩個(gè)載玻片間1 cm2的水凝膠可支撐100 g砝碼(圖2b),并可粘附在多種平坦或彎曲的基材上2c以豬皮膚的剪切力模擬臭氧凝膠的粘附強(qiáng)度,ozonegel-0%的剪切強(qiáng)度為32.7 kPa,當(dāng)臭氧油濃度為3%5%10%20%時(shí),剪切強(qiáng)度分別下降到30.8 kPa25.6 kPa17.2 kPa12.9 kPa通過(guò)靜電吸引、氫鍵和其他力相互作用,臭氧凝膠表現(xiàn)出優(yōu)異的粘合性能,適用于生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用(圖2e2f由于可逆離子交聯(lián),切成兩塊的水凝膠在一段時(shí)間后重新連接并恢復(fù)完整性,兩性離子PDMAPS水凝膠表現(xiàn)出優(yōu)異的自修復(fù)特性2g)。


2. 臭氧凝膠粘附性能:a-b)在人體皮膚上的附著照片及承重照片,c對(duì)各種基材的粘附示意圖d)臭氧凝膠-豬皮膚標(biāo)準(zhǔn)搭接剪切樣條示意圖e)臭氧凝膠的搭接剪切應(yīng)力曲線,f)原始水凝膠和臭氧凝膠的平均搭接剪切強(qiáng)度g)臭氧凝膠-10%的自愈合性能


  臭氧釋放能力是評(píng)估臭氧凝膠性能的一個(gè)重要指標(biāo)(圖3a)。定期收集臭氧凝膠樣品并進(jìn)行滴定,初始臭氧凝膠-10%樣品ROS濃度為57.2±6.1 mmol/kg(相當(dāng)于2745 μg O3/mL)。25℃,24 h內(nèi)累計(jì)臭氧釋放量達(dá)到27.1%36℃,24 h內(nèi)由于溶劑擴(kuò)散和交換增強(qiáng),釋放速率顯著加快達(dá)到36.9%。不同pH值對(duì)臭氧釋放也有影響,在堿性條件下,臭氧釋放速度略快(圖3b)。臭氧凝膠傷口敷料在豬皮膚上進(jìn)行測(cè)試25℃釋放9.2%ROS36釋放16.1%3c),0-36 h釋放速率在18.6-77.4 μg O3/mL·h之間,證實(shí)在生物環(huán)境中,臭氧和ROS釋放可持續(xù)長(zhǎng)達(dá)36 h足以促進(jìn)傷口愈合。


  采用瓊脂擴(kuò)散板法表征臭氧凝膠的抗菌活性(圖4a)。ozonegel-10%ozonegel-20%對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗菌性能。ozongel-10%對(duì)大腸桿菌的抗菌率為97.8%,對(duì)金黃色葡萄球菌的抗菌率為93.7%(圖4b4c)。臭氧凝膠-10%釋放臭氧和ROS,因臭氧可以穿透表皮并進(jìn)入真皮層進(jìn)而達(dá)到抑菌效果,表明臭氧對(duì)深植于真皮層的細(xì)菌、病毒、原生動(dòng)物和真菌具有廣泛的抗微生物活性,所制備的臭氧油乳液水凝膠有望成為抗菌創(chuàng)面敷料。


3. 臭氧釋放和臭氧凝膠的細(xì)胞活力:a2536下水中ozongel-10%的臭氧釋放曲線,b25℃,不同pHozongel-10%的臭氧釋放曲線c)不同溫度下臭氧凝膠-10%在豬皮上的臭氧釋放曲線d臭氧凝膠對(duì)L929細(xì)胞增殖的影響(每組n=6


4. 臭氧凝膠抗菌特性:a負(fù)載不同含量臭氧凝膠對(duì)大腸桿菌金黃色葡萄球菌懸浮液影響的瓊脂平板b)臭氧凝膠對(duì)大腸桿菌的相對(duì)抗菌率,c臭氧凝膠對(duì)金黃色葡萄球菌的相對(duì)抗菌率


  通過(guò)在小鼠背部制造全層創(chuàng)面(每組n=6并用PBS、臭氧凝膠-0%、臭氧凝膠-10%3M TegadermTM水狀膠體敷料覆蓋傷口,探究臭氧油乳液水凝膠作為新型傷口敷料的治療潛力(圖5a)。第9時(shí),臭氧凝膠-10%組的傷口面積顯著小于對(duì)照組和臭氧凝膠-0%組,已接近完全愈合,以市售3M TegadermTM 敷料作為陽(yáng)性對(duì)照,Ozonegel-10%表現(xiàn)出顯著優(yōu)越的傷口愈合效果(圖5b-d。證實(shí)其具有更強(qiáng)的傷口愈合能力。


5. 臭氧凝膠對(duì)傷口的愈合性能:a)用凝膠覆蓋小鼠背部全層創(chuàng)面的傷口修復(fù)過(guò)程,b)第0369PBS(對(duì)照)、臭氧凝膠-0%、臭氧凝膠-10%3M TegademTM 覆蓋的傷口愈合示意圖c)第0369天的傷口面積示意圖d)使用ImageJ軟件計(jì)算的每組平均傷口面積示意圖


  在傷口愈合過(guò)程中,炎癥因子激活引發(fā)炎癥,通過(guò)免疫熒光分析,在傷口愈合早期、中期和晚期顯示出明顯的TNF-αozonegel-0%ozonegel-10%最初都會(huì)增加TNF-α水平,但ozonegel-10%在后期會(huì)降低其水平,通過(guò)調(diào)節(jié)炎癥因子水平來(lái)幫助組織修復(fù)(圖6a6b)。此外,與對(duì)照組相比,ozonegel-0%ozonegel-10%在愈合的中后期均有效降低了CD68水平,表明它們具有調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞活性的能力(圖6c6d)。證實(shí)了ozonegel-10%對(duì)傷口愈合表現(xiàn)出雙重影響,更高效的促進(jìn)愈合過(guò)程并增強(qiáng)組織修復(fù)。


6. 免疫組織化學(xué)染色:aTNF-α免疫組織染色示意圖,bTNF-α相對(duì)表達(dá)情況cCD68免疫組織染色示意圖,dCD68相對(duì)表達(dá)情況


  該工作以Self-Healing Adhesive Hydrogels for Sustained Ozone Release: Enhanced Antibacterial Properties and Improved Wound Healing為題發(fā)表在Journal of Controlled Release上。西京醫(yī)院馬善波博士、長(zhǎng)安大學(xué)2020級(jí)碩士研究生韓聰慧陳曦博士為共同第一作者,西京醫(yī)院燒傷科韓夫副主任醫(yī)師、長(zhǎng)安大學(xué)顏錄科教授與西京醫(yī)院藥劑科石小鵬副主任藥師為共同通訊作者。該研究工作得到空軍軍醫(yī)大學(xué)、國(guó)家自然科學(xué)基金、陜西省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃、與長(zhǎng)安大學(xué)中央高校項(xiàng)目等的支持。


  原文鏈接:https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2024.10.053

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