發(fā)明/申請(qǐng)人：姚菊明，沈凱，吳娟紅，吳羅杰，范科杰
專(zhuān)利號(hào)/申請(qǐng)?zhí)枺?00910096192.X
授權(quán)/申請(qǐng)日期：2009-12-9
本發(fā)明涉及材料制備技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種兩步法鹽析純化重組絲蛋白的方法。本發(fā)明的目的是提供工藝簡(jiǎn)單、成本低、操作方便的一種兩步法鹽析純化重組絲蛋白的方法，包括下列步驟：（1）將含有目的基因表達(dá)質(zhì)粒的大腸桿菌經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)和IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后，離心收集菌體，將其重懸于裂解緩沖液（pH 8.0，50 mmol/L NaH2PO4，300 mmol/L NaCl，10 mmol/L咪唑）中，冰浴并超聲波破碎后，離心（4℃，14500 rpm，10 min）收集上清，調(diào)節(jié)pH至6.0后，添加(NH4)2SO4至20％飽和度，并于37°C靜置2小時(shí)后離心（4℃，12000 rpm，20 min）收集上清液；（2）調(diào)節(jié)上清液的pH至6.0，添加(NH4)2SO4至40％飽和度，并于37°C靜置2小時(shí)后離心（4℃，12000 rpm，20 min）收集沉淀，經(jīng)過(guò)真空干燥后得重組絲蛋白粉末。本發(fā)明的有益之處在于，每升培養(yǎng)基可以生產(chǎn)重組絲蛋白1 g左右，大大提高了重組蛋白的生產(chǎn)效率。