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来自华中U技大学的研Ih员开发了一U新Ҏ(gu)Q证实可利用它来使得淬灭的荧光蛋白分子发生化学重Ȁz,实现树脂包埋荧光微成像。研I结果发表在6?日的《自然·通讯》杂志上QNat. Commun., 2014, DOI: 10.1038/ncomms4992Q?
华中U技大学的曾l群和龚辉是q篇论文的共同通讯作者。前者主要从事生物医学光学、生物医学成像、神l回路与蛋白质功能高分L成像新技术新Ҏ(gu)、生物信息技术等研究。后者的主要研究方向包括认知光学成像与神l信息学、数字生命与d影像?
树脂包埋QResin embeddingQ是一开发成熟的Ҏ(gu)Q被q泛用作为电子显微镜和光学显微镜的基工具?949q_ZNơ利用这一技术生成了用于透射电子昑־镜检查的薄切片。树脂包埋组l具有良好的切片Ҏ(gu),帮助研究人员克服了对厚组l进行显微镜查面临的一些散障?
q几十年来,l色荧光蛋白QGFPQ标记技术荧光成像获得了革命性的H破。利用这一强大的分子生物学技术,GFP附着到目的基因物上以可见的方式标记出它们的表达Q得研Ih员能够对其进行生物学功能和定位分析(延阅读Q天z大学Nature Photonics刊文Q。不q的是,包埋q程中的脱水步骤及某些有机溶剂可D水母GFP和其变异体,如广泛应用的EGFP和EYFP{发生猝灭,由此生成的弱荧光信号D无法q行。这使得研究人员难于树脂包埋方法与C分子标记技术的优点l合h?
多年来,研究人员一直试N过优化包埋实验Ҏ(gu)来改善树脂包埋程序中对于荧光的保护。尽仍然存在猝灭情况,研究人员已成功地对一些用于相x微镜研究的树脂包埋培ȝ?yu)及组l进行了和分析Q但q些Ҏ(gu)难以用于处理厚组l块。目前研Ih员对于树脂包埋程序的荧光猝灭机制仍然未知。此外,也不清楚是否可以成功保留标记l构?
以往的一些研I团队曾在水溶液中系l地研究qGFP的一些特性。也曑֜酸性、碱性和变性剂溶液中探IGFP的行为。在q篇文章中,研究人员受到启发q踪了树脂包埋过E中GFP的行为。他们发现利用通常的包埋程序,大多数的GFP分子通过生色团质子化保持在一U非荧光状态,而未发生变性。在成像q程中利用他们称之ؓ化学重激z?CR)的方法,可ɘq些GFP重新恢复荧光状态。相比于未处理样本,利用q种CRҎ(gu)处理l织荧光强度增高?1.8倍。研Ih员证实,q种CRҎ(gu)能够可靠C留树脂包埋组l中EYFP和EGFP的标记结构,实现对荧光标记组l块的荧光显微成像?
׃树脂包埋和荧光蛋白标记是生物和医学广泛应用的两种技术,作者表CZ们的q种CRҎ(gu)ZU从前不相兼容的重要Ҏ(gu)提供了一个宝늚桥梁Qƈ有可能在未来推动其他的研I域,促成新的研究H破?