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天工大林佳弘/李婷婷課題組《Carbohyd. Polym.》:兩步法構建分級孔隙結構的殼聚糖-羥基磷灰石復合支架用于骨組織工程
2022-09-30  來源:高分子科技

  支架是骨組織工程的重要組成部分,其關鍵功能是在缺陷部位提供臨時的機械支撐,并為細胞生長提供合適的環境。隨著人工骨支架的深入研究,在滿足可降解性和生物相容性等基本要求的同時,如何提升支架機械性能、賦予其骨誘導性同時構建低密度多孔結構成為骨支架研究的重點;诖耍天津工業大學李婷婷副教授與臺灣逢甲大學林佳弘特聘教授和臺灣亞洲大學樓靜文特聘教授合作, 在凹凸不平的PVA/PLA編帶表面采用超聲電沉積法制備羥基磷灰石涂層,擴展了紡織結構在骨組織工程領域的應用,取得了系列研究成果(Journal of Materials Science (2019);Materials Science and Engineering: C 105 (2019) 110062. Nanomaterials 9(5) (2019) 679.)基于前期研究成果,研究團隊提出使用殼聚糖(CS)、聚乙烯醇(PVA)和聚乳酸(PLA)等材料,利用紡織結構和冷凍干燥技術構建出一種具有分級孔隙的芯-殼支架。并在此基礎上改進其性能,制備出一種既滿足力學性能要求,又擁有骨誘導能力,同時具備良好細胞相容性的可降解骨支架。以上研究成果以“Two-step strategy for constructing hierarchical pore structured chitosan–hydroxyapatite composite scaffolds for bone tissue engineering”為題發表在期刊Carbohydrate Polymers上。

 


  文章通過生物可降解PVA/PLA復合紗線制成了中空的復合編帶,將CS溶液注入編帶,將編制結構和冷凍干燥出的多孔海綿結構結合,制備出一種芯-殼結構的骨支架。用生物陶瓷HA混入CS中,通過改變其含量(0-2%),制備CS/HA-PVA/PLA編帶支架。通過低溫等離子體(CAP)處理,經由兩步法獲得了分級孔隙骨支架。 


1 (1) CS / 1.0wt%HA-殼結構凍干骨支架的芯部 SEM 圖和孔徑分析;(2) -殼結構凍干骨支架表面 SEM 圖:(a)   CS(b) 0.5wt%HA;(c)  1.0wt%HA;(d) 2.0wt%HA


  芯部的殼聚糖和HA混合溶液在經過冷凍干燥后,形成了高度互聯的多孔海綿,孔隙尺寸在20-300μm之間。HA濃度為1%時,凍干的CS材料顯示出有序規整類似于魚骨形貌的多孔結構,這種結構的聚合物材料可以誘導神經細胞的生長。編帶表面包覆了由溶液形成的一層 CS/HA 生物活性膜,為支架提供了需要的骨引導能力和生物活性位點。 


2(a-c) 壓縮測試;(a)應力-應變曲線,(b) 壓縮強度,(c) 壓縮模量


  CAP 處理前后純 CS 和 0.5wt%-HA 壓縮模量最大,主要是因為此濃度下,芯部的 CS 的孔徑最小最密集,胞壁均勻且含有的 HA 顆粒少,到壓縮更不容易變形。而 HA 濃度增加,芯部 CS 的孔徑變大,壓縮模量變小。同濃度的支架經過 CAP 表面刻蝕形成的微米級通道,在壓力下相比較光滑纖維,也顯示出更高的壓縮模量。


圖3a-bCAP 處理前后骨支架浸泡 SBF 10 天后 SEM 圖:(a) CS;(b) CS/1.0wt% HA ;(c) CSCAP);(d)  CS/1.0wt% HA(CAP


  在 CAP 處理和添加 HA 顆粒,支架的表面析出HA晶體更多更均勻,形成了大且完整的 HA 晶球顆粒。表明分級孔隙結構對于骨支架的體外礦化能力有良好的提升作用,小于10μm 的微孔擁有更高的粗糙度,可以為 HA 晶體的析出提供更好的形成環境。



4 (1) 在支架上培養 3 天的 MC3T3-E1 細胞形態的 SEM 顯微照片:(a-c) CS / HA;(d-f) CS / HACAP );(2) 用 MTT 法檢測 MC3T3-E1 細胞在支架上 天和 天的存活率


  CAP 處理后,多級孔隙結構骨支架的細胞存活率顯著提高。天時,CAP 處理后的 CS/1.0wt% HA 支架細胞存活率大幅上升至 277.6%,通過SEM觀察細胞形態,表明在純 CS 支架上進行生物陶瓷添加和等離子體處理可進一步增強細胞粘附。


  這些結果表明分級孔隙結構成功改善了CS/HA 支架作為骨支架所需的各項性能,而這種兩步法來制備具有分級孔結構的骨支架,其-結構和等離子體處理的方法為骨支架的設計提供了一種新的思路。論文的第一作者為天津工業大學紡織科學與工程學院李婷婷副教授,天津工業大學和臺灣逢甲大學的林佳弘特聘教授和臺灣亞洲大學的樓靜文特聘教授為論文的通訊作者。該研究得到國家自然科學基金、福建省自然科學基金和天津市自然科學基金的支持。


  論文鏈接: https://doi.org/10.1016/j.carbpol.2021.117765

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