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深圳大學劉洲、孟思 Small:細菌纖維素納米纖絲組裝且具有異質結構的組織工程纖維
2024-02-03  來源:高分子科技

  近期,深圳大學劉洲研究員、孟思副研究員、孔湉湉教授聯合廣州中醫藥大學第四臨床醫學院,基于細菌纖維素特殊的納米纖絲結構開發了一種新型的具有異質多孔網絡結構的纖維狀生物支架材料。這項工作以《Tailoring the Heterogeneous Structure of Macro-Fibers Assembled by Bacterial Cellulose Nanofibrils for Tissue Engineering Scaffolds》為題發表在Small上。


1. 由細菌纖維素納米纖維制成的組織工程支架異質結構示意圖,其特征是皮層致密,芯層松散。這種獨特的設計增強了細胞粘附力,促進了細胞生長。


  細胞外基質(ECM)的納米纖維網絡結構在形成和維持細胞和組織的物理結構方面發揮著關鍵作用,并指導細胞生長、排列和分化。然而ECM來源少、存在跨物種病毒傳播風險、尺寸結構難以設計、機械性能及結構穩定差等問題,限制了其應用。


  細菌纖維素納米纖絲(BCNF)是由一種醋酸菌屬、根瘤菌屬或土壤桿菌屬等微生物分泌而成的纖維狀高結晶纖維素,其直徑為40-60納米。BCNFECM主要成分膠原納米纖維有許多相似之處。例如,它們具有相同的自組裝潛力,并具有相同的次級束狀原纖維結構。BCNF生物相容性優異、可生物降解,并且具有高的持水能力。更重要的是,BCNF富含羥基,可以通過氫鍵連接并交織形成三維ECM結構,為細胞生長提供機械優異、抗溶脹和結構復雜的支架。因此,BCNF是膠原納米纖維的極好替代品,用于制造適用于組織工程和再生醫學的生物支架材料。


  由于細菌分泌的原始BCNF的宏觀形狀為膜狀,往往不能滿足生物支架外形需求,需要進行二次加工。目前BC基生物支架主要的制備策略是使用其溶液或其氧化物氧化細菌纖維素納米纖絲(oxBCNF)的分散液來進行加工。然而,BC溶液無法保持BCNF獨特的納米纖絲結構,而oxBCNF分散液也會由于加工過程中的軸向剪切效應使得納米纖絲發生緊密堆積。因此都難以形成類ECM的三維網絡多孔結構。將BCNF加工成形狀可調控、具有三維網絡結構、抗溶脹性且利于細胞生長的類ECM生物支架仍然是一個挑戰。


  針對此問題,作者結合課題組前期研究,以BC分子的水溶液和oxBCNF的分散體的混合物為紡絲液,使用微流控同軸紡絲裝置,并結合低速旋轉凝固浴紡絲技術,實現了中空纖維狀BC基生物支架的連續制備。低擠出速度和旋轉凝固浴削弱了擠出的軸向剪切取向作用,防止了oxBCNF的緊密堆積。溶解的BC分子則可以作為粘合劑穩固oxBCNF松散堆積形成的三維網絡。為了改善生物支架的細胞粘附性并進一步提高其機械強度,作者通過溶劑的可控脫除及原位聚合技術,實現生物支架“外密內疏”的異質化結構設計及聚多巴胺的表面沉積,分別制備出致密表面的DS-BC/oxBCNFs水凝膠纖維和DS-PDA@BC/oxBCNFs)水凝膠纖維。 


2BC基水凝膠纖維的制備和結構。(a) DS-PDA@BC/oxBCNFs)水凝膠纖維的制備過程示意圖;(bc)收集成卷的DS-BC/oxBCNFs水凝膠纖維和打結的DS-BC/oxBCNFs水凝膠纖維的光學照片;(de)收集成卷的DS-PDA@BC/oxBCNFs)水凝膠纖維和打結的DS-PDA@(BC/oxBCNFs) 水凝膠纖維的光學照片。

  結果表明,經表面致密化的BC基水凝膠纖維的強度、模量及可拉伸性都得到了提升。而同時經過表面致密化及PDA原位沉積處理的DS-PDA@BC/oxBCNFs)水凝膠纖維表現出明顯優于其它BC基水凝膠纖維的細胞粘附性。這主要是因為oxBCNFs較高的表面負電位將阻止同樣帶負電位的細胞在纖維表面沉積,而過于疏松的表面則會導致細胞與纖維的接觸面積過小易脫附。帶有正電性氨基基團的PDA的沉積降低了宏觀纖維表面負電位,而溶劑的可控脫除使宏觀纖維表面致密化,增大了細胞與纖維表面的接觸面積。 


3BC基水凝膠纖維的性能分析。(a) LS-BC/oxBCNFs纖維、DS-BC/oxBCNFs纖維、LS-PDA@BC/oxBC NFs)纖維和DS-PDA@BC/OxBC NFS)纖維的力學性能比較;(b) 與BC/oxBCNFs纖維或PDA@BC/oxBC NFs)纖維共培養的內皮細胞和平滑肌細胞的細胞活性;(c1-c4)與LS-BC/oxBCNFs纖維、DS-BC/oxBCNFs纖維、LS-PDA@BC/oxBCNFs)纖維和DS-PDA@BC/oxBCNFs)纖維共培養4天的內皮細胞的粘附、鋪展和增殖情況;(c5-c8)與LS-BC/oxBCNFs纖維、DS-BC/oxBCNFs光纖、LS-PDA@BC/oxBC NFs)纖維或DS-PDA@BC/oxBCNFs)纖維共培養4天的平滑肌細胞的粘附、鋪展和增殖情況。

  通過對粘附在纖維DS-PDA@BC/oxBCNFs)水凝膠纖維表面內皮細胞的CD31F-肌動蛋白染色熒光圖可以看出,內皮細胞可以完全覆蓋纖維表面,表現出成熟的內皮化進程。而對纖維表面平滑肌細胞的α-SMAF-肌動蛋白染色熒光圖可以看出,蛋白微絲在細胞質周圍形成繩索狀排列,這表明平滑肌細胞中蛋白的正常表達。而且,作者還發現平滑肌細胞中的F-肌動蛋白微絲在DS-PDA@BC/oxBCNFs)水凝膠纖維表面呈現出罕見的螺旋取向分布,這表明平滑肌細胞也是在纖維表面呈螺旋取向分布的。而血管中的平滑肌細胞正是沿著血管周向螺旋取向分布。這樣取向分布結構對血管的性能與功能的實現有重要作用,一方面這種結構有利于提高血管的抗張強度,防止血管脹破,另一方面這種結構也是實現血管通過收縮舒張來輔助血液傳輸這一功能的重要先決條件。因此,這個罕見的特征,并進一步突出了DS-PDA@BC/oxBCNFs)水凝膠纖維作為血管組織工程支架的潛力。 


4. DS-PDA@BC/oxBCNFs)纖維上內皮細胞和平滑肌細胞中蛋白質表達的熒光顯微鏡圖像。(a1-a3)內皮細胞的染色的CD31、細胞核和CD31/細胞核的熒光顯微鏡圖像;(b1-b3)內皮細胞的染色的F-肌動蛋白、細胞核和F-肌動蛋白/細胞核的熒光顯微鏡圖像;(c1-c3)平滑肌細胞的染色的α-SMA、細胞核和α-SMA/細胞核的熒光顯微鏡圖像;(d1-d3)平滑肌細胞的染色的F-肌動蛋白、細胞核和F-肌動蛋白/細胞核的熒光顯微鏡圖像。


作者簡介:


  劉洲,深圳大學化學與環境工程學院特聘研究員、博導。主要從事微流控技術、流體物理、軟物質材料等方面的研究,在Nature CommunicationsAngewandte ChemieAdvanced MaterialsAdvanced Functional MaterialsACS Nano等研究領域重要期刊上發表論文50余篇。所獲榮譽包括日內瓦國際發明展銀獎、中國化學學會基礎研究二等獎、深圳市優青、深圳市高層次人才計劃B類,擔任中國化工學會微化工專委會青年委員等職務。


  孟思,深圳大學化學與環境工程學院副研究員,深圳市高層次人才。師從東華大學纖維領域知名學者朱美芳院士,主要從事纖維的制備與結構設計、智能可穿戴、生物支架材料等方面的研究,以第一作者及通訊作者在BiomaterialsNano ResearchSmallSmall Method等研究領域重要期刊上發表論文10余篇,參與編寫纖維領域重要專著兩部。


  原文鏈接:https://doi.org/10.1002/smll.202307603

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